Los objetivos del estudio fueron examinar el efecto de una solución antibiótica aplicada en el método de proteasa (SGPM) y el efecto de carbohidrasas en SGPM sobre la degradación efectiva de la proteína cruda (CP) con referencia a la degradación in sacco. Para este propósito, se determinó la degradación de CP ruminal de la harina de colza, granos de destilería secos con solubles, granos de trigo, granos de maíz, silo de maíz, silo de hierba y silo de guisante de campo parcial in sacco utilizando tres vacas lecheras con fístula ruminal y en vitro utilizando SGPM. El impacto de la solución antibiótica sobre la degradación de CP por proteasa se investigó suplementando SGPM con solución de Penicilina-Estreptomicina para reducir la proliferación de masa microbiana durante la incubación. La carbohidrasas alfa-amilasa o Viscozym L (mezcla de enzimas degradantes de la pared celular) se añadió al SGPM en cuatro dosis diferentes simultáneamente como una co-incubación para mejorar la accesibilidad de la proteína del alimento. Para la mayoría de los alimentos, la degradación efectiva fue menor cuando se utilizó la solución antibiótica en SGPM (< 0.05). Se recomienda el uso de una solución antibiótica en el SGPM para estandarizar el SGPM. Los valores de degradación in sacco fueron significativamente subestimados por el SGPM y por el SGPM con carbohidrasas co-incubadas (< 0.05). La co-incubación de proteasa y carbohidrasas no fue exitosa en reducir las diferencias con respecto a la degradación de CP in sacco.