El estudio tuvo como objetivo evaluar el daño por criopreservación en esperma con etilenglicol (EG) a diferentes tasas (6, 8, 10%). Se examinó la calidad del esperma fresco, prefrozen y post-descongelado en cuanto a motilidad total, velocidades, daño mitocondrial (Mit-d), daño de membrana (Mem-d) y fragmentación de ADN (DNA-f). El Mit-d, Mem-d y DNA-f se evaluaron mediante citometría de flujo. Se registró una alta motilidad (>95%) y un bajo porcentaje de Mem-d (1.0 +/- 0.5%), Mit-d (1.4 +/- 0.9%) y DNA-f (2.4 +/- 0.8%) para el semen fresco. Se observaron aumentos en Mit-d y DNA-f en el semen prefrozen en comparación con el semen fresco (< 0.05). En el semen descongelado, se observó un aumento de Mit-d (de 2.6 a 3 veces), Mem-d (de 6 a 1 vez) y DNA-f (de 3.3 a 6.6 veces) en comparación con el semen prefrozen. El semen descongelado mostró un aumento alto de Mit-d (de 34 a 37 veces), Mem-d (de 24.5 a 26.6 veces) y DNA-f (de 13 a 18.5 veces). En conclusión, el presente estudio demostró que la integridad de las mitocondrias, la membrana y el ADN sufre daños significativos durante la precongelación y la congelación/descongelación con porcentajes de inclusión de EG del 6 al 10% que afectan su capacidad de fertilización, que se reduce a la mitad de la obtenida con semen fresco. Se sugiere que una solución crioprotectora compuesta por 6% de EG, 6% de glucosa y 5% de leche en polvo desnatada es un protocolo útil para la criopreservación del semen.