El objetivo de este estudio fue probar si los medios condicionados liofilizados de cultivos de células madre mesenquimatosas de pulpa dental humana promueven la curación de defectos de tamaño crítico creados en el cráneo de ratas. Antes del procedimiento quirúrgico, el medio en el que se cultivaron las células madre de pulpa dental fue congelado y liofilizado. Después de la anestesia general, se creó un defecto óseo de 8 mm de diámetro en el cráneo de veinticuatro ratas. Los defectos se llenaron con los siguientes materiales: xenoinjerto solo (G1) o xenoinjerto asociado con medio condicionado liofilizado (G2). Después de 14 o 42 días, los animales fueron sacrificados y las muestras procesadas para análisis histológicos e inmunohistoquímicos. La formación ósea en el centro del defecto se observó solo en el G2 a los 42 días. En ambos momentos, se observó un aumento en la tinción para VEGF, un marcador de angiogénesis, en G2. Consistente con esto, a los 14 días, G2 también tenía un mayor número de vasos sanguíneos detectados por inmunotinción con un anticuerpo anti-CD34. En conclusión, los medios condicionados de cultivos de células madre mesenquimatosas de pulpa dental humana tuvieron un efecto positivo en el proceso regenerativo en defectos óseos de tamaño crítico en ratas. Tanto la formación de hueso como el aumento de la vascularización fueron estimulados por los medios condicionados.