Las células madre mesenquimales (MSC) son consideradas como candidatas principales para terapias basadas en células debido a sus múltiples efectos en la medicina regenerativa. La preacondicionamiento de las MSC en condiciones fisiológicas, como la hipoxia, entornos tridimensionales y el cultivo dinámico antes del trasplante, demostró optimizar su eficacia terapéutica. Cuando se cultivan como agregados o esferoides tridimensionales, las MSC muestran efectos angiogénicos, antiinflamatorios e inmunomoduladores aumentados, así como una mejoría en la capacidad de autorrenovación y tasas de supervivencia después del trasplante, y el cultivo en condiciones dinámicas puede aumentar su viabilidad, proliferación y efectos paracrinos de manera similar. Sin embargo, hasta la fecha, solo unos pocos estudios han utilizado condiciones dinámicas para el cultivo de agregados tridimensionales de MSC. Aún así, la integración de sistemas de biorreactores dinámicos, como biorreactores de agitación o reactores de tanque agitado, podría allanar el camino para una expansión a granel robusta y escalable de agregados de MSC o vesículas extracelulares derivadas de MSC. Esta revisión resume los conocimientos recientes sobre el potencial terapéutico del cultivo de agregados de MSC y se centra en las técnicas dinámicas de generación y cultivo de agregados de MSC.