En los músculos esqueléticos, las fibras musculares están altamente organizadas y agrupadas dentro de la membrana basal. Varios modelos de sustratos microfabricados han fallado en imitar la macroestructura del músculo nativo, incluyendo varias proteínas de la matriz extracelular (ECM). Por lo tanto, desarrollamos y evaluamos un sistema utilizando tejido muscular descelularizado y mioblastos de ratón C2C12 para analizar la interacción entre la ECM nativa y los miocitos. El músculo esquelético de pollo fue cortado en láminas y descelularizado para preparar láminas de músculo esquelético descelularizado (DSMS). Luego, se sembró C2C12 y se diferenciaron en DSMS. Se realizó inmunotinción para examinar la relación entre el estado de adhesión de los mioblastos, la orientación de los miotubos y la orientación del colágeno IV. La supervivencia de los miotubos en cultivo a largo plazo fue confirmada por tinción de calceína. Los mioblastos C2C12 se adhirieron a los andamios en DSMS y desarrollaron placas de adhesión y filopodios. Además, los miotubos C2C12 mostraron orientación a lo largo de la orientación de la ECM dentro de DSMS. En comparación con los platos de plástico, la separación era menos probable en DSMS, y la incubación a largo plazo era posible. Esta técnica de cultivo reproduce un entorno de cultivo celular que refleja las propiedades del músculo esquelético vivo, permitiendo así estudios sobre la interacción entre la ECM y los miocitos.