El cultivo in vitro de hongos micorrícicos arbusculares (AMF) es desafiante debido a su simbiosis biotrófica. El objetivo principal de este estudio fue demostrar el efecto de establecer cultivos duales in vitro de hongos micorrícicos arbusculares (AMF) inoculados en raíces de caoba en el crecimiento de las plantas. Además, se buscaba demostrar que la colonización de las plantas por Glomeromycota puede lograrse con un protocolo replicable. Este estudio estableció cultivos monoxénicos de zanahoria (Daucus carota) Ri T-DNA ROC inoculados con sp. en placas de dos compartimentos. A los 75 días, el crecimiento de hifas alcanzó 223.93 mm en el compartimento de la raíz y 103.71 mm en el compartimento de las hifas. Las esporas producidas in vitro medían 26.14 +/- 1.70 um, más pequeñas que las esporas ex vitro (101.2 +/- 4.22 um). se aisló de los cultivos y pareció estimular el crecimiento de las hifas y el contacto raíz-hongo. A partir de estos cultivos, se estableció un cultivo dual de caoba inoculado con sp. No se observaron diferencias significativas entre las plantas inoculadas y no inoculadas en longitud del tallo, longitud de la raíz, número de raíces o número de hojas a los 30 días. La producción de esporas osciló entre 10,166 y 27,696 por placa, con un promedio de 14,795 +/- 3301, y longitudes de hifas de 3655.46 +/- 308.75 mm. El desarrollo de las hifas incluyó patrones de crecimiento y ramificación, con esporas solitarias y agrupadas. El diámetro de las esporas promedió 27.68 +/- 3.85 um. La colonización arbuscular alcanzó el 41.49% a los 30 días y el 52.13% a los 75 días, superando las tasas reportadas para otros sistemas de cultivo. Los cultivos monoxénicos son una fuente confiable y aséptica de inóculo de alta calidad, que apoya la producción de biofertilizantes y aplicaciones biotecnológicas. Estos métodos proporcionan herramientas valiosas para estudios que involucran AMF, como los demostrados con la caoba.