La cristalización de proteínas juega un papel crucial en las industrias alimentaria y farmacéutica, mejorando la calidad y eficiencia del producto al mejorar la pureza y las características controladas de las partículas. Este estudio se centró en la cristalización de la versátil proteína papaína, extraída de la papaya. Se realizó cristalización por antisolvente. Este método es rentable y es un enfoque simple y eficiente en términos de energía. Más allá de la producción de cristales de proteínas, el proceso de cristalización por antisolvente sirve como un método para encapsular ingredientes farmacéuticos activos (API). El estudio investigó disolventes orgánicos como etanol, acetona y acetonitrilo como posibles antisolventes. Además, se examinó el impacto de variables como la relación de volumen disolvente a antisolvente (S:AS) y la concentración de papaína en el tamaño de las partículas, la distribución del tamaño de las partículas, el potencial zeta, el rendimiento de cristalización y la actividad residual de los cristales de papaína. El etanol emergió como el antisolvente óptimo, reduciendo la solubilidad de la papaína y preservando la estructura cristalina de la papaína con una pérdida mínima de actividad. Se identificaron condiciones óptimas en una relación de volumen S:AS de 1:4 y una concentración de papaína de 30 mg/mL, resultando en cristales esféricos de tamaño nano con un alto rendimiento y actividad preservada. Esta investigación subrayó el papel crucial de la selección cuidadosa de parámetros en la cristalización por antisolvente para lograr características específicas de las partículas mientras se mantiene la funcionalidad de la sustancia cristalizada.