Los flavonoides son una clase importante de compuestos naturales presentes en las plantas. Sin embargo, a pesar de las diversas actividades biológicas y el potencial terapéutico conocidos, la baja abundancia de flavonoides en la naturaleza limita su desarrollo para aplicaciones industriales. En este estudio, nuestro objetivo fue aumentar la producción de flavonoides silenciando la cinamato-4-hidroxilasa (C4H), una enzima involucrada en el punto de ramificación de la vía biosintética de los flavonoides, utilizando el enfoque de interferencia de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente espaciadas (CRISPRi). Diseñamos tres sgRNAs dirigidos a la región del promotor y los clonamos en un constructo de CRISPRi. Después de ser introducidas en un cultivo de células en suspensión, se tomaron muestras de las células transformadas para análisis de qPCR y cromatografía líquida-espectrometría de masas. Dieciséis de 21 líneas celulares mostraron PCR positiva, confirmando la presencia del transgen CRISPRi. El transcript en las células transgénicas fue 0.44 veces menor que en el tipo salvaje. En contraste, los genes relacionados con flavonoides en las otras vías de ramificación, como y, en las células silenciadas mostraron una mayor expresión que el tipo salvaje. La regulación al alza de estos genes aumentó sus respectivos productos, incluyendo pinostrobina, naringenina y ácido clorogénico. Este estudio proporciona información valiosa para el futuro desarrollo de ingeniería metabólica basada en CRISPRi para suprimir genes objetivo en plantas.