Las aquaporinas (AQPs), una familia de canales de agua ubicuos divididos en AQPs ortodoxas, aquagliceroporinas (GLPs) y superAQPs, están presentes en los espermatozoides de sementales. El objetivo de este estudio fue elucidar la relevancia funcional de cada grupo de AQPs durante la criopreservación del esperma de sementales mediante el uso de tres inhibidores diferentes: acetazolamida (AC), florentina (PHL) y propanodiol (PDO). Se evaluaron los parámetros de calidad y función del esperma en presencia o ausencia de cada inhibidor en muestras frescas y descongeladas. En presencia de AC, se alteraron diferentes parámetros (< 0.05), pero no de manera dependiente de la concentración o del tiempo. Se encontró que PHL disminuía la motilidad, viabilidad, integridad del acrosoma y los porcentajes de espermatozoides con bajo desorden lipídico de membrana, alto potencial de membrana mitocondrial (MMP) y altos niveles intracelulares de calcio y superóxidos (< 0.05). Finalmente, la motilidad del esperma, viabilidad, integridad del acrosoma, los porcentajes de espermatozoides con bajo desorden lipídico de membrana, alto MMP y altos niveles de calcio intracelular fueron mayores (< 0.05) en los tratamientos con PDO que en el control. La respuesta del esperma a AC, PHL y PDO indica que las GLPs, en lugar de las AQPs ortodoxas, juegan un papel crucial durante la criopreservación del esperma de sementales. Además, la calidad del esperma post-descongelación fue mayor en los tratamientos con PDO que en el control, lo que sugiere que esta molécula es un potencial crioprotector permeable.