Las poblaciones de fresno verde y fresno blanco están experimentando actualmente importantes declives en sus rangos nativos en América del Norte debido a la infestación por la plaga de insectos exóticos escarabajo del fresno esmeralda. El desarrollo de un método confiable para el almacenamiento a largo plazo de germoplasma de fresno verde y blanco en forma de cultivos embriogénicos utilizando criopreservación sería una ayuda considerable para los esfuerzos de conservación del fresno. Comparamos los porcentajes de recuperación de cultivos embriogénicos de fresno verde y blanco criopreservados utilizando vitrificación frente a métodos de enfriamiento lento. Se probaron tres duraciones de exposición a la Solución de Vitrificación de Plantas 2 (PVS2) (40, 60 y 80 min) para la vitrificación y tres concentraciones de DMSO (5%, 10% y 15%) para el enfriamiento lento, evaluando sus efectos en el porcentaje de cultivos que volvieron a crecer tras la crioconservación. La vitrificación resultó en un porcentaje de recuperación general de cultivos más alto (91%) en comparación con los cultivos que fueron crioconservados utilizando el enfoque de enfriamiento lento (39%), y se observó una iniciación de crecimiento más rápida (5 días frente a 2-3 semanas). La recuperación de cultivos utilizando el enfoque de enfriamiento lento varió significativamente entre experimentos y con el genotipo. La recuperación de tejido vitrificado de la crioconservación no varió con el genotipo, la especie o la duración de la exposición a PVS2. El protocolo de criopreservación por vitrificación proporciona una alternativa confiable y versátil al método tradicional de enfriamiento lento, fortaleciendo nuestra capacidad para preservar valioso germoplasma de fresno para la conservación y restauración.