Este estudio investigó el efecto de la adición de glicerol en diferentes fases de la equilibración del esperma sobre los parámetros de CASA y citometría de flujo de los espermatozoides de carnero descongelados. Se recolectó esperma de carneros Wallachianos adultos. El medio de congelación fue ANDROMED libre de glicerol (Minitub GmbH, Tiefenbach, Alemania) al que se le añadió un 6% de glicerol exógeno en diferentes etapas del proceso de criopreservación. El propósito de este estudio fue comparar dos estrategias de adición de glicerol para la criopreservación del esperma. La primera estrategia incluyó el uso de un medio libre de glicerol para el procedimiento de equilibración y enfriamiento sin glicerol, con la glicerolación del medio por un 6% de glicerol poco antes de la congelación lenta del esperma (GFA). La segunda estrategia incluyó el uso de un medio de congelación ya glicerolado con un 6% de glicerol antes de la equilibración y enfriamiento del esperma y tras la congelación lenta (GA). Las muestras de esperma fueron analizadas después de la equilibración (pero antes de la congelación) y después de la descongelación (en los puntos de tiempo T0, T1 h y T2 h). Se utilizó iSperm mCASA (Aidmics Biotechnology Co., LTD., Taipei, Taiwán) para la evaluación de la cinemática del esperma. La citometría de flujo se utilizó para medir la viabilidad del esperma (integridad de la membrana plasmática/acrosoma) y el potencial de la membrana mitocondrial. Los resultados obtenidos demostraron significativamente que la equilibración sin glicerol con la adición de glicerol poco antes de la congelación es una estrategia prometedora para la criopreservación del esperma de carnero Wallachiano.