El pez globo tigre se ha convertido en la principal especie de pez cultivada en China desde el siglo pasado debido a su alto valor económico. Los machos y hembras de pez globo tigre necesitan 2 y 3 años, respectivamente, para alcanzar la madurez sexual, lo que limita el desarrollo de la investigación en reproducción para esta especie. En los últimos años, el cultivo in vitro de células madre espermatogoniales de pez ha mostrado potencial en la acuicultura. En el presente estudio, establecimos una línea de células madre espermatogénicas. Estas células se caracterizaron por su morfología poligonal, retuvieron predominantemente 44 cromosomas y crecieron rápidamente a 26 grados Celsius y en L-15. Las células madre espermatogénicas pudieron seguir creciendo de manera estable después de más de un año de cultivo in vitro. Mostraron una tinción positiva para la fosfatasa alcalina. Expresaron genes asociados a células germinales, incluyendo varios, como se determinó mediante ensayos semicuantitativos, y casi todas las células mostraron expresar los genes germinales en un ensayo de hibridación fluorescente in situ. En vitro, los experimentos de inducción demostraron que las células madre espermatogénicas poseían la capacidad de diferenciarse en otros tipos de células. Nuestra investigación ha enriquecido el banco de recursos de células madre espermatogoniales de pez, lo que proporcionará un modelo de investigación eficiente para la determinación del sexo y el control de la reproducción en peces, estableciendo una base para la investigación en reproducción posterior.