Este estudio fue diseñado para optimizar el protocolo de vitrificación y calentamiento en straw de embriones bovinos producidos in vitro, comparando dos períodos de equilibración diferentes: equilibrio corto (EC: 3 min) y equilibrio largo (EL: 12 min). Los resultados registrados en blastocistos expandido vitrificados de día siete (D7) y día ocho (D8) fueron tasas de supervivencia y eclosión, conteos celulares, tasa de apoptosis y expresión génica. Mientras que las tasas de supervivencia a las 3 y 24 h después del calentamiento se redujeron (< 0.05) tras la vitrificación, las tasas de eclosión de los embriones D7 vitrificados después de EC fueron similares a las tasas registradas en blastocistos frescos no vitrificados. Las tasas de eclosión de los blastocistos D8 vitrificados fueron más bajas (< 0.05) que las de los controles frescos, independientemente del tratamiento. El conteo total de células, así como los conteos de masa celular interna y células del trofectodermo fueron similares en los blastocistos D7 eclosionados vitrificados después de EC y los blastocistos frescos, mientras que los blastocistos D8 vitrificados mostraron valores más bajos independientemente del tratamiento. La tasa de apoptosis fue significativamente mayor en ambos grupos de tratamiento en comparación con los controles frescos, aunque las tasas fueron más bajas para EC que para EL. No surgieron diferencias en la expresión génica entre los tratamientos, mientras que se observó una abundancia significativamente mayor de transcritos en los blastocistos vitrificados después de EC. Se encontró que un protocolo de vitrificación con un tiempo de equilibración más corto mejoraba los resultados post-calentamiento y la eficiencia temporal después del calentamiento/dilución en straw.