En muchos países, los caballos siguen participando en eventos ecuestres tradicionales como los que se celebran en Menorca (Islas Baleares, España) cada año desde al menos el siglo XIV. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar las variaciones en las concentraciones de cortisol salival para estimar la respuesta de estrés fisiológico en los caballos durante las festividades patronales de Menorca. Se estudiaron dos ediciones diferentes (años 2016 y 2018) de las festividades en honor a la Virgen de Gracia en Maó (Menorca, España). Diecinueve y diecisiete sementales de raza pura Menorca fueron incluidos en el estudio, respectivamente. Los sementales tenían entre siete y doce años. Durante las celebraciones, se recolectaron muestras antes del inicio de las festividades entre las 8-9 a.m. y durante las festividades a las 8-9 p.m. En el segundo día de celebraciones, las muestras se recolectaron a las 8-9 a.m. y a las 3-4 p.m. Finalmente, al día siguiente de las festividades, se recolectó una muestra a las 8-9 p.m. Además, se muestreó un grupo de control a las 8-9 a.m., 3-4 p.m. y 8-9 p.m. Las concentraciones de cortisol salival se evaluaron utilizando un kit comercial de inmunoensayo enzimático especialmente validado para cuantificar cortisol salival en caballos. Las concentraciones de cortisol salival no mostraron diferencias significativas entre las horas de muestreo en el grupo de control (> 0.05). Todas las muestras recolectadas durante las festividades fueron significativamente más altas que las muestras del grupo de control (< 0.05). Dentro de las veinticuatro horas posteriores al final de las celebraciones, las concentraciones de cortisol volvieron a niveles basales y no diferían significativamente del grupo de control (> 0.05). Por lo tanto, el presente estudio describe que la participación de los caballos en estos actos particulares genera una respuesta de estrés aguda y transitoria. En general, el trabajo actual proporciona una base razonable para futuras investigaciones sobre la fisiología del estrés y el bienestar de los caballos que participan en celebraciones tradicionales o eventos similares.