El ajo (L.) es uno de los 30 cultivos que son esenciales para la alimentación mundial; por lo tanto, su conservación debe considerarse una prioridad. Existen dos estrategias principales de conservación de plantas: conservación in situ y ex situ. Ambas estrategias son importantes; sin embargo, la conservación ex situ en campo se ve afectada por factores bióticos y abióticos. Una estrategia complementaria para preservar el germoplasma de ajo a medio plazo es a través del cultivo in vitro por crecimiento mínimo. El objetivo de este estudio fue evaluar la conservación in vitro de tres variedades de ajo mexicano mediante crecimiento mínimo. Las plantas de ajo obtenidas de bulbos de ajo in vitro se preservaron en seis medios de cultivo a 25, 18 y 5 grados C. Se utilizó un diseño aleatorizado y se realizó un análisis de varianza de la supervivencia, contaminación y altura de los brotes de los explantes a los 30, 60, 90, 180, 270 y 365 días de cultivo. Los resultados mostraron que la conservación in vitro de las variedades de ajo Pebeco, Tacátzcuaro Especial y Huerteño se obtuvo de manera óptima durante un año a 5 grados C en un medio de cultivo basal de Murashige y Skoog (MS) con 68.46 g L de sacarosa y 36.43 g L de sorbitol. Así, el protocolo logrado puede adaptarse a otras variedades de ajo para almacenamiento a medio plazo en bancos de germoplasma.