Gentile de Puglia (GdP) es una raza de ovejas autóctona del sur de Italia incluida entre las razas ovinas amenazadas por la erosión genética y el riesgo de extinción, que han recibido atención de instituciones locales e internacionales, enfatizando así la necesidad de acciones de conservación de germoplasma. En el presente estudio, se realizaron dos enfoques de reproducción asistida, destinados a la conservación de GdP: (1) evaluación de la eficiencia reproductiva en la granja, expresada como tasa de embarazo (PR), tasa de embarazo gemelar (tPR) y puntuación de condición corporal (BCS), durante tres ciclos de cría consecutivos y (2) recuperación de complejos cumulus-oocito inmaduros (COC) de corderos prepuberales, vitrificación, maduración in vitro (IVM) y evaluación de la etapa meiótica y estado bioenergético-oxidativo en comparación con los de otras razas comerciales italianas y europeas. La PR y la tPR se redujeron progresivamente con el tiempo. En todos los momentos de examen clínico, la BCS fue significativamente más baja en ovejas no gestantes en comparación con las gestantes. Los COCs frescos de corderos prepuberales de GdP lograron la maduración meiótica y mostraron un estado bioenergético-oxidativo saludable después de la IVM. La vitrificación redujo la tasa de maduración de los oocitos en todos los grupos. Sin embargo, los oocitos maduros retuvieron su madurez citoplasmática, expresada como un patrón de distribución y actividad mitocondrial, lo que indica una competencia de desarrollo prometedora. En conclusión, los enfoques de reproducción asistida clínica y biotecnológica pueden apoyar las estrategias de conservación de GdP y otras razas locales de ovejas en el sur de Italia.