La sensibilidad al congelamiento sigue siendo un problema crítico en los procedimientos de criopreservación de semen de sementales. Para explorar este tema en profundidad, se recolectó semen de diez sementales, se diluyó con tres extensores diferentes, se transportó al laboratorio y luego se centrifugó y congeló con cuatro extensores diferentes. Realizamos análisis de la cinética de los espermatozoides, el potencial de membrana mitocondrial (MMP) y el contenido de peróxido de hidrógeno tanto antes como después de la congelación. Además, evaluamos la actividad antioxidante utilizando los métodos ABTS y FRAP y medimos los metabolitos estables de óxido nítrico (NOx) en los extensores en blanco, el plasma seminal y los extensores condicionados por espermatozoides antes y después de la congelación. Encontramos una variabilidad significativa en la actividad antioxidante y el contenido de NOx de los extensores en blanco y el plasma seminal. En el plasma seminal, la actividad antioxidante basada en ABTS y los valores de NOx se correlacionaron con algunos parámetros cinemáticos de los espermatozoides y el MMP en semen refrigerado, mientras que no se observó correlación en los parámetros de esperma congelado. La función del esperma varió significativamente entre sementales, pero no entre extensores, ya sea antes o después de la congelación. Sin embargo, se encontraron diferencias significativas en las actividades antioxidantes y los valores de NOx entre los extensores condicionados después de la congelación. Estos resultados proporcionan nuevas perspectivas sobre los factores que contribuyen a la variabilidad en la tolerancia al congelamiento de esperma en sementales individuales.