L. (G.) Don es la planta más estudiada debido a su alto valor farmacológico. El cultivo in vitro utiliza varias partes de la planta, como hojas, nudos, entrenudos y raíces, para inducir callo y la posterior regeneración de plantas. Sin embargo, hasta ahora, se ha realizado poco trabajo sobre el tejido de anteras utilizando técnicas de cultivo de tejidos vegetales. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo es establecer un protocolo para la inducción in vitro de callo utilizando anteras como explantes en medio MS (Murashige y Skoog) enriquecido con diferentes concentraciones y combinaciones de reguladores de crecimiento de plantas (PGRs). El mejor medio para la formación de callo contiene altas concentraciones de ácido alfa-naftalenacético (NAA) y bajas concentraciones de kinetina (Kn), mostrando una frecuencia de formación de callo del 86.6%. Se realizó un análisis SEM-EDX para comparar la distribución elemental en las superficies de las anteras y los callos derivados de anteras, y se observó que ambos eran casi idénticos en su composición elemental. Se llevó a cabo un análisis de cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS) de extractos de metanol de anteras y callos derivados de anteras, que reveló la presencia de una amplia gama de fitocompuestos. Algunos de ellos son ajmalicina, vindolina, coronaridina, esqualeno, pleiocarpamina, estigmasterol, etc. Más importante aún, alrededor de 17 compuestos están presentes exclusivamente en el callo derivado de anteras (no en anteras). El estado de ploidía del callo derivado de anteras se examinó mediante citometría de flujo (FCM), y se estimó en 0.76 pg, mostrando la naturaleza haploide del callo. Por lo tanto, el presente trabajo representa una forma eficiente de producir compuestos medicinales de alto valor a partir de callo de anteras en un período de tiempo menor y a mayor escala.