subsp. (Pss) es una bacteria gramnegativa que causa el marchitamiento de Stewart, una enfermedad severa en el maíz. Nativa de América del Norte, se ha propagado globalmente a través del comercio de semillas de maíz. Las variedades de maíz resistentes y los insecticidas son cruciales para mitigar el impacto económico de la enfermedad. Pss es una plaga de cuarentena, lo que requiere certificación fitosanitaria para el comercio de semillas en los países europeos. Las pruebas diagnósticas precisas, incluyendo PCR en tiempo real, son fundamentales para detectar Pss y distinguirla de otras bacterias, como subsp. (Psi), una bacteria no cuarentenaria asociada con semillas de maíz. La genética de poblaciones es una herramienta valiosa para estudiar la adaptación, la especiación, la estructura poblacional, la diversidad y la evolución en patógenos bacterianos de plantas. En este estudio, se informan las actividades clave de comparaciones interlaboratorios para evaluar la sensibilidad diagnóstica (DSE), la especificidad diagnóstica (DSP) y la precisión (ACC) de diferentes PCR en tiempo real capaces de detectar Pss en semillas. Se presentan los resultados de la secuenciación completa de aislamientos bacterianos italianos. Este estudio mejora nuestra comprensión de los métodos moleculares para diagnosticar e identificar patógenos en semillas de maíz, mejorando el conocimiento de los genomas de Pss para prevenir su propagación y rastrear posibles rutas de entrada de áreas endémicas a no endémicas.