El sedimento en suspensión es un componente importante de los ecosistemas de agua dulce que apoya procesos biogeoquímicos, geomorfológicos y ecológicos. El conocimiento actual sobre el sedimento en suspensión se basa en gran medida en estudios de aguas superficiales; sin embargo, una mejor comprensión de los procesos de sedimento en suspensión en aguas superficiales y en aguas subterráneas in situ mejorará las estimaciones de carga de contaminantes y las estrategias de remediación de cuencas. Se realizó un estudio en una cuenca representativa de uso mixto y agroforestal de la cuenca de la Bahía de Chesapeake en el noreste de EE. UU., utilizando un diseño de estudio experimental de cuenca, que incluía ocho subcuencas anidadas. Se recolectaron muestras de agua de arroyos y aguas subterráneas superficiales mensualmente desde enero de 2020 hasta diciembre de 2020 (n = 192). Las muestras de agua se analizaron para sedimento en suspensión utilizando métodos analíticos gravimétricos (mg/L) y de difracción de partículas por láser (um). Los resultados mostraron que las aguas subterráneas superficiales contenían concentraciones de sólidos totales en suspensión significativamente más altas (p < 0.001) y tamaños de partículas más pequeños, en comparación con el agua de arroyo. Las diferencias se atribuyeron a la variabilidad entre sitios en términos de composición del suelo, uso/cobertura del suelo y geología superficial, así como al método de muestreo de aguas subterráneas superficiales utilizado. Los resultados tienen importantes implicaciones para las estimaciones de transporte de contaminantes y la modelización biogeoquímica en cuencas agroforestales. Se necesita continuar el trabajo para mejorar la caracterización del sedimento en suspensión en aguas subterráneas superficiales (es decir, masa y tamaños de partículas) y la utilidad de esta información para estrategias diseñadas para cumplir con los objetivos de calidad del agua.