Comparación de polimerasas de ADN termoestables disponibles comercialmente con actividad de transcriptasa inversa en ensayos acoplados de reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa
Autores: Smirnova, Evgeniya V.; Blagodatskikh, Konstantin A.; Barsova, Ekaterina V.; Varlamov, Dmitriy A.; Kramarov, Vladimir M.; Ignatov, Konstantin B.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2025
Acceso abierto
Artículo científico
2025
Comparación de polimerasas de ADN termoestables disponibles comercialmente con actividad de transcriptasa inversa en ensayos acoplados de reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa
Patógenos de ARN
Mezclas de enzimas
Polimerasas de ADN termoestables artificiales
Detección de ARN de SARS-CoV2
RT-PCR en tiempo real
Licencia
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Citaciones: Sin citaciones
La reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR) es una herramienta importante para la detección de moléculas de ARN objetivo y el análisis de patógenos de ARN. La RT-PCR acoplada se realiza con una mezcla de enzimas que contiene una transcriptasa inversa y una ADN polimerasa termoestable. Hasta la fecha, varias empresas biotecnológicas ofrecen polimerasas de ADN termoestables artificiales con actividad de transcriptasa inversa incorporada para su uso en la RT-PCR acoplada en lugar de las mezclas de enzimas. Aquí, comparamos las polimerasas de ADN artificiales y las mezclas de enzimas convencionales para la RT-PCR realizando ensayos de RT-PCR de punto final y en tiempo real utilizando ARN del coronavirus 2 relacionado con el síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV2) y moléculas de ARNm endógenas como plantillas. Descubrimos que las enzimas artificiales eran adecuadas para diferentes aplicaciones de RT-PCR, incluida la detección de ARN de SARS-CoV2 pero no para la amplificación de RT-PCR de fragmentos largos.
Descripción
La reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR) es una herramienta importante para la detección de moléculas de ARN objetivo y el análisis de patógenos de ARN. La RT-PCR acoplada se realiza con una mezcla de enzimas que contiene una transcriptasa inversa y una ADN polimerasa termoestable. Hasta la fecha, varias empresas biotecnológicas ofrecen polimerasas de ADN termoestables artificiales con actividad de transcriptasa inversa incorporada para su uso en la RT-PCR acoplada en lugar de las mezclas de enzimas. Aquí, comparamos las polimerasas de ADN artificiales y las mezclas de enzimas convencionales para la RT-PCR realizando ensayos de RT-PCR de punto final y en tiempo real utilizando ARN del coronavirus 2 relacionado con el síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV2) y moléculas de ARNm endógenas como plantillas. Descubrimos que las enzimas artificiales eran adecuadas para diferentes aplicaciones de RT-PCR, incluida la detección de ARN de SARS-CoV2 pero no para la amplificación de RT-PCR de fragmentos largos.