El calicivirus felino (FCV) es un virus altamente contagioso que causa enfermedades del tracto respiratorio superior, comúnmente conocido como gripe felina. Está ampliamente distribuido en todo el mundo y representa una gran amenaza para la salud felina. Por lo tanto, es esencial encontrar un método eficiente y rápido para detectar el FCV. En este estudio, se desarrolló y validó por primera vez un ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa colorimétrica (RT-LAMP), utilizando rojo neutro como indicador, para dirigirse al gen ORF2 del FCV. Además, el estudio comparó las capacidades diagnósticas de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR anidada y ensayos RT-LAMP para detectar el FCV en muestras clínicas. La amplificación RT-LAMP optimizada se llevó a cabo a 56.3 grados C. La técnica detectó visualmente el FCV en 70 minutos, con un límite de detección de 14.3 x 10 copias/uL, y no mostró reactividad cruzada con otros patógenos felinos. De 54 muestras de hisopos orofaríngeos, 17 dieron positivo para el FCV utilizando tanto PCR anidada como RT-LAMP, mientras que solo una dio positivo utilizando PCR convencional. La tasa de positividad fue mayor con PCR anidada y RT-LAMP (31.48%) en comparación con PCR convencional (1.85%). En consecuencia, estos resultados demostraron la efectividad del ensayo RT-LAMP colorimétrico desarrollado en este estudio como una alternativa para diagnosticar el FCV en gatos.