El proceso de entrecruzamiento del colágeno es una de las formas más importantes de mejorar la capacidad de mineralización del colágeno. Sin embargo, el efecto regulador del entrecruzamiento dinámico sobre la biomineralización in vitro sigue siendo poco claro. En este estudio, se preparó colágeno mineralizado entrecruzado dinámicamente bajo diferentes procesos de entrecruzamiento, de acuerdo con el proceso de entrecruzamiento y mineralización del hueso natural. La mineralización se realizó durante 12 h a 4, 8 y 12 h de entrecruzamiento del colágeno. La microscopía electrónica de barrido (SEM) y la microscopía electrónica de transmisión (TEM) mostraron las características de la mineralización entrecruzada dinámicamente en términos de transformación morfológica y distribución. El análisis de espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (FTIR) mostró las características de cristalinidad de la formación de cristales de hidroxiapatita (HA). La mineralización entrecruzada dinámica pre-entrecruzada se refiere al proceso de entrecruzamiento durante un período de tiempo y luego la mineralización entrecruzada lateral. El contenido mineral, la estabilidad enzimática y las propiedades mecánicas del colágeno mineralizado se mejoraron a través de un proceso de entrecruzamiento dinámico de pre-entrecruzamiento. El rendimiento de hinchamiento se redujo a través del proceso de entrecruzamiento dinámico de pre-entrecruzamiento. Este estudio sugiere que el proceso de entrecruzamiento dinámico a través de pre-entrecruzamiento podría facilitar la permeación y deposición de minerales entre las fibras de colágeno, mejorar la eficiencia de mineralización y, por lo tanto, aumentar la resistencia mecánica de la biomineralización. Este estudio puede proporcionar nuevas ideas y una base teórica para diseñar andamios de colágeno mineralizado con mejor capacidad de reparación ósea.