La clonación molecular y el análisis de la estructura-función de un inhibidor de tripsina de alforfón de Tartaria y su aplicación en la lucha contra hongos fitopatógenos
Autores: Ruan, Jing-jun; Tian, Shan-jun; Yan, Jun; Chen, Hui; Xu, Ru-hong; Cheng, Jian-ping
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2018
Acceso abierto
Artículo científico
2018
La clonación molecular y el análisis de la estructura-función de un inhibidor de tripsina de alforfón de Tartaria y su aplicación en la lucha contra hongos fitopatógenos
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Agronomía y Ciencia de los Cultivos
Palabras clave
Inhibidores de proteasas de plantas
Inhibidores de tripsina
Caminata genómica
Marco de lectura abierto
Mutagénesis dirigida por sitio
Patógenos de plantas fúngicas
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 27
Citaciones: Sin citaciones
Las inhibidores de proteasas de plantas hospederas ofrecen resistencia a las proteasas de patógenos invasores. Los inhibidores de tripsina (TIs), en particular, sirven como agentes protectores contra los ataques de insectos y patógenos. En este estudio, diseñamos un par de cebadores degenerados basados en motivos altamente conservados en los extremos N- y C-terminales del TI de trigo sarraceno (; ) para clonar la porción central. Se realizó un "genomic walking" para aislar las regiones flanqueantes 5" y 3" de . Demostramos la exitosa amplificación por PCR de una porción de 644 pb de . El ADN completo de contiene un marco de lectura abierto completo de 264 pb, codificando 87 aminoácidos con una masa de aproximadamente 9.5 kDa. La secuencia de proteína fue 49% idéntica y 67% similar a inhibidores de proteasas de papa. La mutagénesis dirigida al sitio identificó los residuos, Asp y Arg, como cruciales para la actividad inhibitoria del . Los recombinantes y mutantes inhibieron tanto el crecimiento de hifas como la germinación de esporas de . Las concentraciones inhibitorias del 50% calculadas variaron de 5-100 g mL para la germinación de esporas y de 1-50 g mL para el crecimiento fúngico. Por lo tanto, el recombinante puede funcionar en la resistencia del hospedero contra una variedad de patógenos fúngicos de plantas.
Descripción
Las inhibidores de proteasas de plantas hospederas ofrecen resistencia a las proteasas de patógenos invasores. Los inhibidores de tripsina (TIs), en particular, sirven como agentes protectores contra los ataques de insectos y patógenos. En este estudio, diseñamos un par de cebadores degenerados basados en motivos altamente conservados en los extremos N- y C-terminales del TI de trigo sarraceno (; ) para clonar la porción central. Se realizó un "genomic walking" para aislar las regiones flanqueantes 5" y 3" de . Demostramos la exitosa amplificación por PCR de una porción de 644 pb de . El ADN completo de contiene un marco de lectura abierto completo de 264 pb, codificando 87 aminoácidos con una masa de aproximadamente 9.5 kDa. La secuencia de proteína fue 49% idéntica y 67% similar a inhibidores de proteasas de papa. La mutagénesis dirigida al sitio identificó los residuos, Asp y Arg, como cruciales para la actividad inhibitoria del . Los recombinantes y mutantes inhibieron tanto el crecimiento de hifas como la germinación de esporas de . Las concentraciones inhibitorias del 50% calculadas variaron de 5-100 g mL para la germinación de esporas y de 1-50 g mL para el crecimiento fúngico. Por lo tanto, el recombinante puede funcionar en la resistencia del hospedero contra una variedad de patógenos fúngicos de plantas.