Las células madre mesenquimales (MSC) representan menos del 1% de la médula ósea (BM). Varios métodos se utilizan para su aislamiento, como la separación por gradiente o la centrifugación, pero estos métodos no son directos y, por lo tanto, se requiere un crecimiento de adherencia plástica o clasificación magnética/activada por fluorescencia. Para superar esta limitación, investigamos el uso de una nueva tecnología separativa para aislar las MSC de la BM; separa las células sin etiqueta basándose únicamente en sus características físicas, preservando sus propiedades físicas nativas y permitiendo la visualización en tiempo real de las células. La BM obtenida de pacientes operados por defectos osteocondrales se concentró directamente en la sala de operaciones y luego se analizó utilizando la nueva tecnología. Basándonos en la imagen en vivo de las células y el perfil de la muestra, fue posible destacar tres fracciones (F1, F2, F3), y las células recolectadas se evaluaron en términos de su morfología, fenotipo, CFU-F y potencial de diferenciación. Se encontraron MSC multipotentes en F1: mayor actividad de CFU-F y potencial de diferenciación hacia linajes mesenquimales en comparación con las otras fracciones. Además, la tecnología elimina las células muertas, eliminando los glóbulos rojos no deseados y las células estromales no progenitoras de la muestra biológica. Esta nueva tecnología proporciona un método efectivo para separar las MSC de la BM fresca, manteniendo sus características nativas y evitando la manipulación celular. Esto permite la identificación selectiva de células con un impacto potencial en enfoques de medicina regenerativa en el campo ortopédico y aplicaciones clínicas.