Ensayo de Citometría de Tejidos con Segmentación Nuclear para Cuantificar Células NETóticas en Neutrófilos Estimulados por Espermatozoides en Especies Veterinarias
Autores: Rivera-Concha, Rodrigo; León, Marion; Ponce-Rojas, Nikol; Prado-Sanhueza, Aurora; Uribe, Pamela; Taubert, Anja; Hermosilla, Carlos; Sánchez, Raúl; Zambrano, Fabiola
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2025
Acceso abierto
Artículo científico
2025
Ensayo de Citometría de Tejidos con Segmentación Nuclear para Cuantificar Células NETóticas en Neutrófilos Estimulados por Espermatozoides en Especies Veterinarias
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Zootecnia
Palabras clave
Neutrófilos
Activación
Expansión del núcleo
Mamíferos
Perros
Vacas
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 7
Citaciones: Sin citaciones
Cuando se activan, los neutrófilos hacen tres cosas: fagocitan, liberan sustancias químicas que combaten infecciones y liberan trampas que atrapan y matan patógenos. Determinar la expansión del área nuclear de los neutrófilos activados es fundamental para demostrar la activación temprana de los neutrófilos y se ha convertido en un estándar. Aquí, mostramos un método automatizado para medir cuánto se expande el núcleo de los neutrófilos en dos mamíferos diferentes: perros y vacas. Para ambas especies, los neutrófilos se separaron de la sangre y se incubaron con esperma fresco. Para las muestras de perro, los neutrófilos y el esperma se incubaron durante 120 minutos, y para las muestras de vaca, los neutrófilos y el esperma se incubaron durante 240 minutos. Se tomaron imágenes de fluorescencia utilizando un microscopio de fluorescencia y luego se analizaron. Las imágenes muestran la liberación de trampas extracelulares de neutrófilos cuando son activados por espermatozoides en ambas especies. Esto se demuestra porque la elastasa de neutrófilos y la tinción de ADN están en el mismo lugar. Los núcleos de las células se expandieron a tan solo 15 minutos y se detectaron hasta 120 minutos en ambas especies. El análisis mostró que los conjuntos de datos de ambas especies eran fiables y consistentes con otros métodos que se habían publicado. Este método fue creado para medir automáticamente la expansión de los núcleos de neutrófilos en diferentes especies.
Descripción
Cuando se activan, los neutrófilos hacen tres cosas: fagocitan, liberan sustancias químicas que combaten infecciones y liberan trampas que atrapan y matan patógenos. Determinar la expansión del área nuclear de los neutrófilos activados es fundamental para demostrar la activación temprana de los neutrófilos y se ha convertido en un estándar. Aquí, mostramos un método automatizado para medir cuánto se expande el núcleo de los neutrófilos en dos mamíferos diferentes: perros y vacas. Para ambas especies, los neutrófilos se separaron de la sangre y se incubaron con esperma fresco. Para las muestras de perro, los neutrófilos y el esperma se incubaron durante 120 minutos, y para las muestras de vaca, los neutrófilos y el esperma se incubaron durante 240 minutos. Se tomaron imágenes de fluorescencia utilizando un microscopio de fluorescencia y luego se analizaron. Las imágenes muestran la liberación de trampas extracelulares de neutrófilos cuando son activados por espermatozoides en ambas especies. Esto se demuestra porque la elastasa de neutrófilos y la tinción de ADN están en el mismo lugar. Los núcleos de las células se expandieron a tan solo 15 minutos y se detectaron hasta 120 minutos en ambas especies. El análisis mostró que los conjuntos de datos de ambas especies eran fiables y consistentes con otros métodos que se habían publicado. Este método fue creado para medir automáticamente la expansión de los núcleos de neutrófilos en diferentes especies.