El ácido fosfórico (A.P.; 37%) es el agente mordiente más utilizado en la práctica dental diaria. Sin embargo, los mordientes ácidos pueden inducir necrosis en la mucosa oral y causar la ulceración del tejido periodontal cuando no se utiliza un dique de goma. V-prep es una nueva alternativa práctica y ha mostrado resultados satisfactorios. Se utiliza como preparación antes de la aplicación de un composite de ionómero de vidrio modificado por resina (RMGIC) para unir los brackets ortodónticos. El objetivo de este estudio fue investigar el efecto del V-prep en las células de fibroblastos gingivales orales comparando el daño celular y la viabilidad celular después del uso de V-prep y un mordiente ácido fosfórico convencional con diferentes tiempos de aplicación y concentraciones. Por lo tanto, se cultivó y trató fibroblastos gingivales paso 6 (GFP6) con un mordiente ácido y V-prep en tres concentraciones diferentes (1:1, 1:2 y 1:10) durante dos duraciones de aplicación diferentes (30 s y 1 min). Se evaluaron los cambios morfológicos, la muerte celular y la viabilidad celular. Se observaron piocnosis, cariolisis, daños nucleares reversibles e irreversibles y destrucción de la membrana para ambos mordientes en las concentraciones más altas y en las duraciones de aplicación más largas. Se utilizaron pruebas U de Mann-Whitney para los análisis estadísticos. La aplicación del V-prep durante 30 s mostró mejores valores que el mordiente ácido en el análisis de daño celular y en el análisis de viabilidad celular (p = 0.03). V-prep a una concentración de 1:10 aplicada durante 30 s puede preservar la viabilidad de las células de fibroblastos gingivales hasta un 100%. La toxicidad de V-prep es igual o menor que la toxicidad del mordiente ácido que se utiliza comúnmente en odontología. Por lo tanto, el V-prep se puede utilizar con precauciones intraoralmente, y debe aplicarse sobre el esmalte como un gel durante solo 30 s antes de ser enjuagado y retirado.