Se describen cinco nuevas especies del género neotropical Astyanax Baird & Girard, pertenecientes al río Iguazú, en la frontera entre los estados de Paraná y Santa Catarina, sureste de Brasil, y se redescribe Astyanax gymnogenis Eigenmann. Cada nueva especie se distingue de las demás especies de Astyanax de la cuenca alta del río Paraná por combinaciones exclusivas de: forma de los dientes, número de cúspides dentales, distancia entre el tercio infraorbitario y el preopérculo, número de escamas en la línea lateral, serie longitudinal de escamas, número de branquiespinas y diferencias en la forma de los rasgos corporales y cefálicos. Este estudio propone que las especies del género Astyanax del río Iguazú son probablemente endémicas, ya que todas ellas están ausentes en los afluentes del sistema hidrográfico del río Paraná. El alto grado de diversificación alcanzado por las especies de Astyanax en la cuenca del Iguazú podría atribuirse al largo período de aislamiento de este río respecto de la cuenca del Río Paraná, causado por las Cataratas del Iguazú. Esta barrera probablemente aisló dichas cuencas, dando lugar a grupos originales de Characiformes y posteriormente de especies de Astyanax, ambos aislados entre sí y diferentes de sus parientes en cuencas vecinas.