El semen seleccionado por sexo es ahora una característica integral de la producción de ganado lechero y es esencial para la rentabilidad y el mantenimiento de la productividad. Los procedimientos de selección de sexo y la posterior criopreservación pueden dañar las membranas de los espermatozoides, reducir la vida útil de los espermatozoides y, en última instancia, disminuir la fertilidad del semen seleccionado por sexo en comparación con el semen convencional. Este estudio tuvo como objetivo mejorar la calidad del semen ablatado por género. Nuestro enfoque fue aumentar el contenido de colesterol en las membranas plasmáticas de los espermatozoides para reducir el daño a las membranas y mantenerlas intactas hasta la inseminación. La adición de colesterol a las células espermáticas no aumentó la motilidad de los espermatozoides. Sin embargo, la porción de células espermáticas con acrosomas y membranas intactas aumentó significativamente del 28.9 +/- 1.2% al 34.1 +/- 1.2% después de agregar colesterol. La actividad mitocondrial, el progreso de maduración y la capacidad de unión a las células del oviducto (requerida para la vida útil de los espermatozoides dentro del sistema reproductivo de la vaca) se mantuvieron. El tratamiento con colesterol no retrasó el tiempo de fertilización, pero aumentó significativamente la capacidad de fertilización. Después de 12 horas de co-incubación con ovocitos, la tasa de fertilización aumentó al 82 +/- 3% en el grupo tratado con colesterol, en comparación con el 74 +/- 3% en el grupo de control (< 0.05). En general, la adición de colesterol aportó una mejora mínima a la calidad del semen ablatado por género después de la descongelación, y se necesitan más estudios para maximizar los beneficios del colesterol.