El conocimiento de la composición química del propóleos es crucial para entender las características de los productos de diferentes orígenes, pero también para el control de calidad y fines regulatorios. Hasta la fecha, no se han publicado monografías oficiales o análisis oficiales que permitan a los investigadores evaluar el propóleos de manera adecuada. Este estudio se centra en la caracterización de veintisiete muestras de propóleos italianos y la identificación de marcadores químicos que definen su procedencia geográfica. El contenido total de polifenoles (TP) y el contenido total de flavonoides (TF), junto con la cuantificación de pinocembrina, crisina, galangina y éster fenetílico del ácido cafeico (CAPE), se identificaron como marcadores potenciales. Además, se realizaron ensayos DPPH para evaluar la actividad antirradical de las muestras de propóleos. Nuestros hallazgos demostraron que los TPs, TFs y la pinocembrina diferían en el propóleos de diferentes orígenes, especialmente en muestras de las islas. Sin embargo, la cuantificación de la suma de crisina y galangina y CAPE proporcionó una distinción más clara del origen geográfico de las muestras de propóleos. En contraste, el ensayo DPPH no resultó útil para este propósito, ya que la mayoría de los resultados fueron similares y, por lo tanto, no significativos. Este estudio sienta las bases para futuras investigaciones sobre el propóleos. Estos hallazgos podrían contribuir al desarrollo de métodos más refinados para distinguir los orígenes del propóleos, mejorando la comprensión, valoración y control de calidad de este producto natural en diversas aplicaciones.