La esterilidad masculina citoplasmática (CMS) de Ogura se considera la más prometedora para ser utilizada como un sistema de heterosis en todo el mundo, pero carece de suficientes líneas restauradoras. En este estudio, se compararon observaciones de mitosis en células de punta de raíz (RTC) y meiosis en células madre de polen (PMC) para asegurar el número de cromosomas y la formación de un puente cromosómico utilizando las líneas restauradoras R2000, CLR650 y Zhehuhong (una nueva restauradora) como material experimental. Además, se detectaron marcadores moleculares de fragmentos cromosómicos exógenos y se determinaron las diferencias en la secuencia y expresión de los genes restauradores en las tres líneas para identificar las características distintivas de Zhehuhong. Los resultados mostraron que el número de cromosomas en Zhehuhong era estable (2n = 38), lo que indica que el segmento cromosómico exógeno de rábano se había integrado en el cromosoma de Zhehuhong. La detección de marcadores moleculares reveló que Zhehuhong fue detectado en la mayoría de los loci, con solo el locus RMA05 ausente. El segmento cromosómico exógeno de rábano de Zhehuhong difería de R2000 y CLR650. Las células madre de polen de Zhehuhong mostraron retraso cromosómico en la metafase I meiótica, anafase I meiótica y anafase II meiótica, lo que fue consistente con R2000 y CLR650. El gen restaurador en Zhehuhong tenía 85 SNPs en comparación con R2000 y 119 SNPs en comparación con CLR650, lo que indica la característica distintiva de Zhehuhong. En términos de expresión espacial, el nivel más alto se detectó en los estambres en las tres líneas restauradoras. Además, en términos de expresión temporal, la expresión génica de Zhehuhong fue más alta a una longitud de yema de 4 mm. Nuestros resultados indicaron claramente que Zhehuhong es una nueva línea restauradora para el sistema CMS de Ogura, que puede ser utilizada en la utilización de heterosis en colza.