Las técnicas convencionales de selección de esperma utilizadas en ARTs dependen de pasos de centrifugación. Hasta la fecha, los diferentes estudios reportados sobre los efectos de la centrifugación en la motilidad del esperma de sementales han proporcionado resultados contradictorios y no incluyen efectos sobre la funcionalidad mitocondrial y diferentes parámetros oxidativos. Se analizaron los efectos de diferentes protocolos de centrifugación (300x durante 5, 300x durante 10, 1500x durante 5 y 1500x durante 10 frente a sin centrifugación) sobre la motilidad y el estado oxidativo en esperma de sementales criopreservados. Después de la centrifugación, casi todos los parámetros de motilidad se alteraron significativamente, como se observó mediante análisis de esperma asistido por computadora. Un ensayo polarográfico de consumo de oxígeno mostró una disminución progresiva en la respiración mitocondrial desde el protocolo más suave hasta el más fuerte. Mediante microscopía confocal de escaneo láser, se encontró una reducción significativa del potencial de membrana mitocondrial, en cualquier protocolo probado, y efectos dependientes del tiempo, a la misma fuerza centrífuga. Se encontró un aumento en el índice de fragmentación del ADN en cualquier protocolo probado y efectos dependientes del tiempo a la misma fuerza centrífuga, mientras que la carbonilación de proteínas aumentada se observó solo en la fuerza centrífuga más fuerte. Estos resultados proporcionan una comprensión más completa sobre los efectos inducidos por la centrifugación en el esperma de sementales criopreservados y sugieren que, incluso con una fuerza débil durante un corto tiempo, la centrifugación afecta diferentes aspectos del metabolismo y la funcionalidad del esperma equino.