Los cementos a base de silicato de calcio han alcanzado excelentes niveles de rendimiento en endodoncia, proporcionando resultados predecibles y exitosos. Para evaluar mejor las propiedades de estos materiales bioactivos, el presente estudio tuvo como objetivo comparar la biocompatibilidad y las propiedades antibiofilm de ProRoot MTA y Biodentine. Se cultivaron células de sarcoma osteogénico humano (Saos-2) en muestras de ProRoot MTA y Biodentine o en presencia de extractos de ambos cementos. Se realizaron ensayos de viabilidad celular, medición de especies reactivas de oxígeno (ROS), análisis de inmunofluorescencia, así como evaluaciones morfológicas. Además, se utilizó para evaluar la capacidad de formación de biofilm en discos de ProRoot MTA y Biodentine. Finalmente, ambos cementos se aplicaron in vivo para tratar dientes permanentes inmaduros afectados por pulpitis reversible. Resultados: El ensayo de viabilidad celular demostró que las células Saos-2 tenían una citotoxicidad dependiente de la dosis y del tiempo hacia ambos cementos analizados, aunque las células expuestas a ProRoot MTA mostraron una mejor vitalidad celular que las expuestas a Biodentine (< 0.001). Ambos cementos demostraron producción de ROS, siendo esta mayor en el caso de Biodentine que en ProRoot MTA (< 0.001). Las imágenes de inmunofluorescencia del citoesqueleto y las adhesiones focales no mostraron diferencias en las células Saos-2 cultivadas en presencia del eluato de ProRoot MTA; mientras que en los grupos de Biodentine, las células mostraron una morfología y adhesiones focales más similares a las de la muestra de control, a medida que disminuyó la concentración del eluato. El análisis morfológico reveló que las células Saos-2 estaban más aplanadas y exhibieron una mejor dispersión cuando estaban adheridas a discos de ProRoot MTA que a los de Biodentine. Las propiedades antibiofilm mostraron una inhibición poderosa dependiente del tiempo de la colonización superficial y un efecto antibiofilm de ambos cementos. Clínicamente, se logró la formación completa de la raíz de los elementos tratados utilizando los dos cementos estudiados, mostrando resultados estables a lo largo del tiempo. Se demostró que ProRoot MTA y Biodentine son biocompatibles y poseen propiedades antibiofilm. Su aplicación clínica en terapia de pulpa vital proporcionó resultados exitosos después de 2 años de seguimiento.