La antracnosis del chile es uno de los patógenos fúngicos más comunes y destructivos que afecta el rendimiento y la calidad del pimiento. Aunque las proteínas WRKY desempeñan roles cruciales en la resistencia del pimiento a una variedad de patógenos, el mecanismo de su resistencia a la antracnosis aún se desconoce. En este estudio, encontramos que la expresión fue claramente inducida por la infección y los tratamientos con ácido salicílico (AS). El silenciamiento mejoró la resistencia del pimiento a, mientras que la sobrerregulación transitoria en el pimiento aumentó la susceptibilidad a. Además, encontramos que la sobrerregulación en tomates disminuyó significativamente la resistencia a través de las vías de señalización de AS y especies reactivas de oxígeno (ERO). Además, CaWRKY50 suprimió la expresión de dos genes relacionados con AS, () y (), al unirse directamente al motivo W-box en sus promotores. Adicionalmente, demostramos que CaWRKY50 interactúa con CaWRKY42 y CaMIEL1 en el núcleo. Así, nuestros hallazgos revelaron que CaWRKY50 desempeña un papel negativo en la resistencia del pimiento a través de la vía de señalización mediada por AS y el sistema de defensa antioxidante. Estos resultados proporcionan una base teórica para el mejoramiento molecular de variedades de pimiento resistentes a la antracnosis.