Los probióticos son beneficiosos para la salud humana y animal y se han utilizado como suplementos dietéticos para diversos propósitos, como mejorar la inmunidad, mejorar el rendimiento del crecimiento y modular la microbiota intestinal. Los probióticos tienen características específicas del huésped que son mejores cuando se obtienen del huésped. La cría de burros en China ha estado en auge en los últimos años; sin embargo, hay una escasez de probióticos específicos para burros. Para desarrollar probióticos para burros, este estudio exploró las bacterias lácticas (LAB) derivadas de burros para inhibir patógenos comunes y aquellos restringidos a equinos. Ocho aislados derivados de burros exhibieron actividad antibacteriana contra cuatro patógenos indicadores probados. Los aislados fueron seleccionados en función de su potencial en características probióticas in vitro. La cepa L9 aislada en este estudio tenía excelentes propiedades probióticas, como tasas de crecimiento rápido y producción de ácido, tolerancia al estrés gástrico e interno, mayor hidrofobicidad, auto-agregación, actividad de co-agregación con los cuatro patógenos indicadores y ausencia de adquisición de resistencia a antibióticos. La cepa L9 es un candidato probiótico superior y se espera que se aplique en la industria de cría de burros después de una validación adicional en experimentos in vivo.