, un parásito apicomplejo patógeno, infecta aproximadamente a un tercio de la población mundial y representa una grave amenaza para la salud pública global. Las proteínas de micronema (MICs) secretadas por el micronema, un orgánulo secretor apical de , desempeñan roles importantes en la invasión, motilidad y supervivencia intracelular de . En este estudio, seleccionamos 11 genes de interés (GOIs) de , MICs tentativas predichas para estar localizadas en micronemas, y utilizamos el sistema CRISPR-Cas9 para construir cepas con etiquetado de epítopos y cepas de knockout de genes para explorar la localización y función de estas 11 MICs tentativas. El ensayo de inmunofluorescencia mostró que nueve MICs tentativas (TGME49_243930, TGME49_200270, TGME49_273320, TGME49_287040, TGME49_261710, TGME49_205680, TGME49_304490, TGME49_245485 y TGME49_224620) estaban localizadas o parcialmente localizadas en el micronema, consistente con la predicción. Sin embargo, TGME49_272380 y TGME49_243790 mostraron localizaciones diferentes a las predicciones, estando localizadas en el retículo endoplásmico y el gránulo denso, respectivamente. La caracterización funcional adicional de las 11 cepas RH reveló que la eliminación de estos 11 GOIs no tuvo un efecto significativo en la formación de placas, replicación intracelular, egreso, capacidad de invasión y virulencia de . Aunque estos 11 GOIs no son genes esenciales para el crecimiento y virulencia de los taquizoítos de la cepa RH tipo I, pueden tener roles potenciales en otros estadios de desarrollo o en otros genotipos de . Por lo tanto, se debe realizar más investigación para explorar el posible papel de las nueve y los otros dos GOIs en otros estadios del ciclo de vida y otros genotipos de .