Las enfermedades virales de los cultivos cultivados a menudo son causadas por el desbordamiento de virus de plantas silvestres. El tabaco es un cultivo económico importante cultivado a nivel mundial. Los patógenos virales del tabaco son temas tradicionales importantes en los estudios de virología y consideraciones clave en las prácticas de cría de tabaco. Un virus de ARN de cadena positiva, el virus del mosaico del tomate silvestre (WTMV), que pertenece al género en la familia, se encontró recientemente infectando tabaco en China. En este estudio, se recolectaron muestras de hojas de tabaco enfermas en la provincia de Henan, China, durante 2020-2021. Varias muestras de diferentes ubicaciones fueron identificadas como positivas para WTMV. Se construyó un clon de ADN infeccioso basado en uno de los aislados de WTMV. Al utilizar este clon, encontramos que el WTMV del tabaco podría establecer infecciones en hospedadores naturales, demostrando una posible ruta de desbordamiento y hibernación de WTMV en el campo de tabaco. Además, se encontró que la infección por WTMV estaba acompañada de otros virus del tabaco en el campo. Los experimentos de co-inoculación indican la exclusión de superinfección (SIE) entre WTMV y otras especies que infectan el tabaco. En general, nuestro trabajo revela aspectos novedosos de la evolución e infección de WTMV en el tabaco y proporciona una herramienta importante para estudios futuros de WTMV.