El trasplante de células germinales se ha realizado con éxito en peces ciprínidos; sin embargo, aún no se ha establecido un sistema de cultivo in vitro estable a largo plazo para las células madre espermatogoniales (SSCs) de carpa. Este estudio desarrolló un método de cultivo efectivo para las SSCs de carpa del Río Amarillo (YRSSCs), manteniendo su proliferación y capacidad de stemness durante más de un año en condiciones de medio optimizadas. Las YRSSCs cultivadas mostraron un mantenimiento diploide estable y demostraron tanto potencial de diferenciación in vitro como capacidad de colonización in vivo después del trasplante. Este trabajo proporciona un sistema de cultivo in vitro confiable para las SSCs de carpa, creando nuevas oportunidades para aplicaciones de cría genética en la acuicultura.