La terapia con células madre en pacientes felinos necesita una alta cantidad de células madre/estromales mesenquimatosas (MSCs), lo que requiere una propagación in vitro bajo condiciones de cultivo que pueden impactar potencialmente las características celulares y la estabilidad genética. Este estudio tuvo como objetivo evaluar las características in vitro y la estabilidad cito genética de las MSCs derivadas del tejido adiposo de gatos (cAT-MSCs). Para este propósito, se evaluaron las características morfológicas, el potencial clonogénico y la capacidad proliferativa de las cAT-MSCs en los pasajes 2 (P), P y P. Se evaluaron la multipotencia y el inmunofenotipo. Se realizaron análisis cito genéticos hasta P. Las cAT-MSCs exhibieron una morfología en forma de huso en los primeros pasajes. El tiempo de duplicación aumentó de 2.5 días en P a 9.4 en P y 10.5 en P, acompañado de la observación de anomalías nucleares como formación de clústeres, cariorrexis, cariolisis y una disminución en el índice mitótico en P. Las células demostraron capacidad de multipotencia y fueron CD45-, CD90+ y CD44+. El análisis de metafase en P y P reveló algunas indicaciones de inestabilidad estructural como huecos, rupturas, eliminaciones, duplicaciones y segregación temprana de cromátidas, pero estas alteraciones no mostraron un aumento a través de los pasajes. En conclusión, las cAT-MSCs disminuyeron su capacidad proliferativa después de P, acompañadas de alteraciones morfológicas y signos de inestabilidad estructural.