En los últimos años, el valor de la carne y los productos lácteos de los búfalos se ha convertido en una preocupación importante en la cría de búfalos, y la mejora de la calidad de la carne de búfalo es clave para proteger los recursos genéticos de los búfalos y resolver el problema del suministro de carne. Los miARN juegan un papel significativo en la regulación del desarrollo muscular. Sin embargo, el mecanismo preciso por el cual regulan el desarrollo de los músculos esqueléticos de los búfalos sigue siendo en gran medida inexplorado. En este estudio, examinamos los perfiles de expresión de miARN en los mioblastos de búfalo durante las etapas de proliferación y diferenciación. Se identificaron un total de 177 miARN expresados diferencialmente, de los cuales 88 estaban regulados al alza y 89 al baja. Nos centramos en un nuevo miARN, llamado bbu-miR-493-5p, que se expresó diferencialmente de manera significativa durante la proliferación y diferenciación de los mioblastos de búfalo y se expresó en gran medida en los tejidos musculares. Los resultados de RNA-FISH mostraron que el bbu-miR-493-5p se localizó principalmente en el citoplasma para fomentar la proliferación y diferenciación de los mioblastos de búfalo. En conclusión, nuestro estudio sienta las bases para futuras investigaciones sobre el papel regulador de los miARN en el crecimiento del músculo de búfalo.