El ácido hipocloroso (HClO) es una especie reactiva de oxígeno (ROS) común, con una alta reactividad química. La mieloperoxidasa (MPO) es una enzima que cataliza reacciones redox in vivo entre HO y Cl para producir HClO. Niveles anormales de HClO y MPO pueden llevar a estrés oxidativo, daño tisular irreversible y, por lo tanto, a enfermedades graves; por lo tanto, se están convirtiendo en biomarcadores importantes y objetivos terapéuticos. En este trabajo, utilizando la escisión específica inducida por HClO de ADN modificado con fosforotioato para desencadenar la amplificación en círculo rodante (RCA), se han desarrollado biosensores asistidos por RCA para la detección altamente sensible y específica de HClO y MPO. Solo se utilizan dos oligonucleótidos de ADN en los sistemas de detección. La poderosa capacidad de amplificación de señal de RCA otorga a los sistemas de detección una alta sensibilidad, y la respuesta fluorescente específica de la tioflavina T (ThT) a los G-cuádruplexes en los productos de RCA hace posible una salida de señal sin etiquetas. Se demostró que los biosensores propuestos funcionan bien no solo para la cuantificación sensible y específica de HClO y MPO con límites de detección de 1.67 nM y 0.33 ng/mL, respectivamente, sino también para la evaluación de la capacidad de cribado e inhibición de los inhibidores de MPO, lo que promete grandes avances en el diagnóstico de enfermedades y el análisis de medicamentos.