El envejecimiento de las semillas es un problema importante para el almacenamiento a largo plazo de semillas de tabaco. El pretratamiento de las semillas ha sido ampliamente aplicado en la producción de tabaco. En este estudio, se lleva a cabo el desarrollo de genes marcadores moleculares que codifican las proteínas L-isoaspartil metiltransferasa NtPIMT1 y 8-oxoG DNA glicosilasa 1 NtOGG1 para detectar el grado de envejecimiento de las semillas y el efecto del pretratamiento de las semillas en el tabaco. El análisis de PCR en tiempo real cuantitativo (qRT-PCR) revela que se observan mRNAs relativamente más altos de y en las semillas secas y en germinación temprana. Las expresiones de y están correlacionadas negativamente con el grado de daño en las semillas no peletizadas y peletizadas después de tratamientos de envejecimiento acelerado. Los mejores efectos tempranos del pretratamiento con giberelina (GA) en la velocidad y la germinación uniforme se observan en las semillas pretratadas durante 33 h, y se observan expresiones relativamente más bajas de y en las semillas pretratadas. Los genes y tienen potencial para ser utilizados como marcadores moleculares en la detección del grado de envejecimiento de las semillas y el efecto del pretratamiento en el tabaco.