Mejorar la capacidad de las plantas para adquirir y utilizar eficientemente el fósforo (P) es un enfoque prometedor para desarrollar una producción de pastizales sostenible. Este estudio tuvo como objetivo identificar cultivares de ray-grass con eficiencia de uso de P contrastante y evaluar sus respuestas bioquímicas y moleculares asociadas. Nueve cultivares de ray-grass se cultivaron hidropónicamente en condiciones óptimas (0.1 mM) o deficientes en P (0.01 mM), y se evaluaron la absorción de P, la biomasa seca, la eficiencia de adquisición de fósforo (PAE) y la eficiencia de utilización de fósforo (PUE). En consecuencia, se seleccionaron dos cultivares con alta PAE pero baja PUE (Ansa y Stellar), y dos cultivares con baja PAE y alta PUE (24Seven y Extreme) para analizar la actividad y la expresión génica de las fosfatasa ácidas (APasas), así como los niveles de transcripción de los transportadores de P. Nuestros resultados mostraron que los cultivares de ray-grass con alta PAE fueron principalmente influenciados por respuestas relacionadas con las raíces, incluyendo la expresión de genes que codifican para el transportador de P, la fosfatasa ácida púrpura y la actividad de APasa. Además, los rasgos que contribuyeron en gran medida a mejorar la PUE fueron la expresión de y, y la actividad de APasa en los brotes. Estos resultados podrían ser útiles para evaluar y desarrollar cultivares con alta eficiencia en el uso de P, contribuyendo así a mejorar la gestión del P en sistemas de pastizales.