Las sustancias húmicas (SH) constituyen un componente principal de la materia orgánica del suelo (MOS) y desempeñan un papel crucial en la formación y fertilidad del suelo. Sin embargo, la información completa sobre los cambios cuantitativos y cualitativos en las SH tras la aplicación de biochar al suelo aún necesita mejorarse. Este estudio informa sobre el impacto de la aplicación de biochar a tasas de 0, 10 y 20 t ha-1 (B0, B10, B20), tanto con como sin fertilización nitrogenada a diferentes niveles (N0, N1, N2), en los contenidos de MOS y SH a lo largo de las temporadas de cultivo entre 2014 y 2019. Los hallazgos revelan cambios en los contenidos de MOS y SH debido a la adición de biochar y fertilización. Notablemente, el aumento más sustancial en el contenido de carbono orgánico del suelo se observó en los tratamientos B20N1 y B10N1, en marcado contraste con el tratamiento de referencia B0N0. Se notó una disminución en la humificación de la MOS en todos los tratamientos que involucraron biochar, ya sea solo o combinado con diferentes niveles de fertilización nitrogenada. Un cambio positivo interesante en los contenidos de SH se observó en B10N2, donde un aumento en los ácidos húmicos y una disminución en los ácidos fúlvicos mejoraron la estabilidad de las SH y la calidad de las SH. Estos hallazgos arrojan luz sobre la intrincada dinámica de la MOS y las SH en respuesta a la aplicación de biochar y la fertilización nitrogenada a lo largo de múltiples temporadas de vegetación de cultivos en los Luvisoles haplicos arcillosos de Europa Central.