Los hábitos alimenticios inadecuados, entre otros factores, conducen a deficiencias nutricionales en todo el mundo. Se han realizado intentos para controlar los déficits de micronutrientes, como la biofortificación de cultivos habitualmente consumidos, pero la interacción entre los componentes alimentarios puede afectar la biodisponibilidad de los nutrientes. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de la pro-vitamina A en la biodisponibilidad del hierro en la mezcla de caupí y yuca biofortificados, en comparación con sus contrapartes convencionales. Se determinó la composición química de la materia prima y se realizó un estudio in vivo, con ratas Wistar, utilizando el método de depleción-repleción. Se evaluó la expresión génica de proteínas del metabolismo del hierro. Los resultados se compararon mediante análisis de varianza (ANOVA), seguido por la prueba de Tukey (p < 0.05). El caupí biofortificado (BRS) mostró un aumento de aproximadamente el 19.5% en el contenido de hierro en comparación con el convencional (BRS). No se observaron diferencias en la ganancia de hemoglobina entre los grupos. Sin embargo, los animales alimentados con caupí biofortificado fueron similares al sulfato ferroso (grupo Control) en cuanto a la expresión de las proteínas hefaestina y ferroportina, lo que sugiere una mayor eficiencia en la absorción intestinal de hierro. Por lo tanto, este estudio señala una mayor eficiencia del caupí biofortificado en la biodisponibilidad de hierro, independientemente de la presencia de pro-vitamina A.