El marchitamiento por Botryosphaeria, una enfermedad significativa del tronco de la vid (GTD) causada por varios patógenos, representa una seria amenaza para la viticultura. El biocontrol surge como una alternativa sostenible prometedora al control químico, alineándose con prácticas vitícolas respetuosas con el medio ambiente. Este estudio evaluó el potencial de biocontrol in vitro, in vivo e in situ de bacterias nativas chilenas aisladas de flora silvestre y comunidades endofíticas de la vid. Los ensayos de biocontrol in vitro examinaron 15 cepas bacterianas a 10, 22 y 30 grados Celsius, identificando cuatro cepas con >30% de inhibición del crecimiento micelial. En ensayos de agar difusible y placas dobles, las bacterias promotoras del crecimiento de plantas AMCR2b y GcR15a, que fueron aisladas de flora nativa, lograron una inhibición significativa del crecimiento, con reducciones de hasta ~50% (agar difusible) y hasta ~46% (placa doble). Los experimentos in vivo en esquejes de vid revelaron que las cepas AMCR2b y GcR15a inhibieron el crecimiento micelial (17-90%); las vides más jóvenes (1-5 años) fueron más susceptibles. Los ensayos in situ utilizando L. cv. Cabernet Sauvignon y Sauvignon Blanc demostraron una mayor susceptibilidad fúngica en Sauvignon Blanc. Estos resultados destacan el potencial de las cepas AMCR2b y GcR15a para ser agentes de biocontrol efectivos contra las GTDs en un amplio rango de temperaturas, contribuyendo a una viticultura sostenible.