El azul de metileno (MB) se combina con un radiofármaco para el mapeo intraoperatorio de los ganglios linfáticos centinela (SLN), pero su papel durante la extirpación de SLN aún no se ha investigado en medicina veterinaria. El objetivo de este estudio fue evaluar si el MB aumentaba la detección quirúrgica de SLN más allá del uso del solo de la sonda gamma intraoperatoria (IGP) en perros clínicamente negativos para ganglios con tumores de mastocitos (MCT) tras la detección de los linfocentros centinela (SLC) mediante linfoscintigrafía planar preoperatoria. Los perros inscritos se sometieron a la excisión de MCT y exploración de SLC guiados tanto por MB como por IGP. Los datos registrados para cada SLN fueron tinción (azul/no azul), radiactividad (caliente/no caliente) y estado histopatológico (HN0-1 vs. HN2-3). Se incluyeron un total de 103 perros con 80 MCT cutáneos, 35 subcutáneos y 1 mucocutáneo; se exploraron 140 SLC, para un total de 196 SLN extirpados. Asociar MB con IGP aumentó la tasa de detección de SLN del 90% al 95%. Un total del 44% de los SLN eran metastásicos: el 86% eran azules/cálidos, el 7% solo eran azules, el 5% solo eran cálidos y el 2% eran no azules/no cálidos. Todos los SLN HN3 eran cálidos. Combinar MB con IGP puede aumentar la tasa de detección de SLN en perros con MCT; no obstante, todos los ganglios linfáticos identificados durante la disección deben ser extirpados, ya que podrían estar sin teñir pero ser metastásicos.