El conocimiento adquirido a lo largo de los años sobre la regulación in vivo del desarrollo cardíaco ha promovido el establecimiento de protocolos de diferenciación dirigida para obtener cardiomiocitos (CM) y otras células cardíacas a partir de células madre pluripotentes humanas (hPSC), las cuales desempeñan un papel crucial en la función y homeostasis del corazón. Entre otros avances en el campo, la transición de cultivos homogéneos de CM a microtejidos cardíacos multicelulares más complejos ha aumentado el potencial de estos modelos para estudiar trastornos cardíacos in vitro y para aplicaciones clínicamente relevantes como pruebas de detección de fármacos y cardiotoxicidad. Esta revisión aborda el estado del arte de la generación de diferentes células cardíacas a partir de hPSC y el impacto de la transición de la diferenciación de CM de cultivo 2D a un entorno 3D. Además, se revisan los métodos actuales que pueden emplearse para generar microtejidos cardíacos 3D y, por último, se resalta la adopción de estos modelos para aplicaciones in vitro y su adaptación a entornos de detección de mediano a alto rendimiento.