Se han investigado los esferoides de hepatocitos de mamíferos como modelos experimentales alternativos en varios contextos, ya que los sistemas tridimensionales (3D) han demostrado el potencial de imitar escenarios in vivo. La descripción de los modelos 3D de hepatocitos de peces sigue siendo mínima. Este estudio tiene como objetivo caracterizar más a fondo los esferoides de hepatocitos primarios de trucha marrón en distintos momentos hasta 25 días en cultivo. Se consideraron la viabilidad, la biometría, la histomorfología y la expresión basal de una selección de genes (metabolismo y desintoxicación, transporte de eflujo y señalización estrogénica). La expresión génica de muestras de hígado completo del mismo donante de pez se evaluó simultáneamente. Después de 12 días en cultivo, los esferoides de hepatocitos mostraron estabilidad biométrica y morfológica. Desde el día 12 hasta el día 20 en cultivo, los niveles de expresión basal de la mayoría de los genes seleccionados no variaron. Los niveles de ARNm dirigidos fueron más altos en las muestras de hígado de trucha marrón en comparación con los esferoides de hepatocitos. A pesar de eso, los datos respaldaron que este modelo se asemeja a algunas características in vivo. Como modelo experimental alternativo, mostró potencial para ser utilizado en una ventana de tiempo estable que puede ser aprovechada para pruebas de exposición a diferentes xenobióticos, a saber, compuestos estrogénicos.