El sulfuro de hidrógeno (HS) es el vasodilatador gaseoso más recientemente establecido, producido enzimáticamente a partir del metabolismo de la cisteína, involucrado en una serie de procesos fisiopatológicos. Sin embargo, su detección precisa in vivo es crítica debido a su volatilidad y tendencia a formar derivados de azufre sulfano, limitando así la interpretación de datos sobre sus roles biológicos. Hemos desarrollado nuevas aplicaciones del método simple y rápido para medir la liberación de HS en sistemas de cultivo celular, basado en la prueba de tiras de acetato de plomo. Esta prueba, previamente utilizada predominantemente en microbiología, fue comparada con el método de trampa de agar, aplicado, en paralelo, tanto en cultivos celulares como en muestras libres de células. El azufre sulfano representa la especie principal derivada del HS intracelular. Varios sondas fluorescentes están disponibles para la cuantificación de derivados de HS intracelularmente. Presentamos aquí una alternativa al método clásico de imagen para la evaluación de azufre sulfano, que se ejecuta en un citómetro de flujo, basado en el etiquetado de la sonda SSP4. La citometría de flujo resultó ser más directa, totalmente cuantitativa y menos consumidora de tiempo en comparación con la microscopía y más precisa en relación con el ensayo de lectura de placas de fluorescencia múltiple. Los nuevos métodos de aplicación para la determinación de HS parecen ser totalmente adecuados para el análisis de la liberación de HS y el contenido de azufre sulfano en muestras biológicas.